熒光顯微鏡的出現(xiàn)是為了彌補一般光學顯微鏡的缺陷,即難以將特定的目標物從背景中區(qū)分出來。醫(yī)院病理科的日常工作之一就是讀片子,非常依賴經(jīng)驗。因為即使某種病原標記物已經(jīng)經(jīng)過了標識,在顯微鏡下仍然難以辨識。而熒光標識只在特定波長的光源激發(fā)下才會發(fā)光,而且發(fā)出的光也具有特定的波長。多個標識可以依次成像,背景極低,互相干擾也低,所以在科研和醫(yī)療中廣泛應用。
熒光顯微鏡是熒光顯微檢測的專用工具,它是光學顯微鏡的一種。它除了具有光學顯微鏡的基本結構和光學放大作用外,基于熒光的特性,還具備以下*的功能要求:
(1)提供足夠能量的能激發(fā)出熒光的光源。
(2)有著適應不同物質(zhì)所需的激發(fā)光譜一組濾色片,從光源中選擇合適的激發(fā)光譜,使析出的光譜與該物質(zhì)的吸收光譜重合,以期望獲得最大的熒光。
(3)為獲得較弱的熒光圖像,還要建立一套截止濾色片,它使所需觀察的熒光進入系統(tǒng)成像,而將其余的光波,包括發(fā)射光阻擋在外,用來提高圖像的襯度。
(4)放大的光學系統(tǒng)應適應熒光的特性,最終獲得既能觀察又能攝影的高亮度、高分辨力的良好襯度的熒光圖像。
(5)儀器的安全性。應用汞燈要防止紫外線的泄漏和汞燈的爆炸,保證電器安全。
其實熒光顯微鏡是利用特定波長的光照射被檢物體產(chǎn)生熒光進行鏡檢的顯微光學觀測技術,已有100多年歷史。近年來,由于免疫熒光在醫(yī)學研究、診斷領域里的廣泛應用,F(xiàn)ISH、綠色熒光蛋白(GFP)技術分別在基因組學、蛋白質(zhì)組學研究方面的推廣,顯微照相、數(shù)字CCD成像技術的輔助驅(qū)動,賦予這一傳統(tǒng)技術更新的應用價值和生命力。